多参数流式细胞术是一个强大的诊断工具，能快速评估细胞抗原表达、提供适合疾病分类的免疫表型信息。本文描述了一种通过流式细胞术鉴定异常淋巴细胞群的通用方法，包括B、T、NK和霍奇金淋巴瘤，适合于临床和科研。了解正常淋巴细胞抗原的共同表达模式对于诊断疾病和评估微小残留是至关重要的。本文重点介绍了B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤免疫分型的流程，也描述了经典霍奇金淋巴瘤和结节淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤的诊断策略。
1.背景介绍
目前非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金淋巴瘤的免疫分型主要是通过免疫组化和流式细胞术完成，多参数流式细胞术是一种先进的诊断技术，在临床上广泛用于评估复杂的细胞混合物，如外周血、骨髓、体液、淋巴结和其他组织标本。流式细胞术被认为是临床实验室评价造血过程的金标准，该技术能够对超过几个数量级的细胞群体进行快速鉴别。
在流式细胞仪中，细胞悬浮液在液流压力下进入到流动室，单个细胞被引导通过石英毛细管(流动细胞)，在一种或多种光源(通常是激光)照射后，细胞表面的特定抗原和荧光素标记的抗体结合，荧光素标记的抗体会激发荧光，以此来评估多种细胞的特性。液体(外周血、骨髓、脑脊液等)和组织标本的常规分析可以提供关于造血群体的独特诊断信息。一般来说，流式细胞术能对细胞表面的多种抗原进行评估，通常为4到6种，并逐渐增加到10种或更多。本文讨论了流式细胞术在淋巴瘤诊断分型中的实际应用，重点是在多参数分析中识别异常免疫表型。
2.研究材料
针对常规B细胞和T细胞非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤分析的抗原见表1，使用改良的LSRII流式细胞仪(Becton-Dickinson)、特异性抗体和荧光染料进行研究。
表1淋巴瘤分析的抗原
3研究方法
3.1样本准备
首先将组织标本分解，形成单细胞悬液，然后加入适量的荧光标记的抗体。
3.2设门策略、数据分析和结果解读
3.2.1B细胞分析
B细胞NHL首先使用正向散射面积和正向散射高度的图进行设门，以排除所谓的“双重”事件。随后，使用前向和侧光散射设门。随着细胞退化，最初的前向散射减小，而侧向散射增大，后来两者的强度都减小。这些影响因素可以通过选择性射门排除。目前使用前向和侧光散射设门，排除CD5阳性CD19阴性的T细胞，随后分离CD19标记的B细胞。首先
